稳定表达人G250基因小鼠renca细胞株的建立

• 作者: 于继云 李云奇 林晓亮 殷小涛 王伟 田仁礼 肖毅 董金凯 高江平
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: G250 稳定转染 小鼠 基因表达
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 页码范围: 506-508,518
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 2866字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2013.05.026

摘要

目的建立能够稳定表达人G250基因的renca细胞株。方法采用PCR扩增出人G250基因编码区长度的互补序列，根据DNA重组技术定向插入到pIRES-neo真核表达载体中，得到重组表达质粒pIRES-neo-G250。用阳离子脂质体介导法将该质粒稳定转染到renca小鼠细胞中，通过调整G418的浓度筛选出阳性的克隆，蛋白免疫印迹和免疫荧光测试验证人G250基因转染小鼠renca细胞株后的表达情况。结果经过限制性内切酶鉴定和序列分析发现pIRES-neo-G250重组质粒构建正确，蛋白免疫印迹结果表明，可以从稳定转染pIRES-neo-G250的小鼠renca细胞中检测到G250的蛋白条带，流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果表明，稳定转染pIRES-neo-G250的renca细胞用人的G250特异性抗体检测到有高效的荧光表达。结论成功建立了稳定、高效表达pIRES-neo-G250分子的人G250基因renca细胞株，为后续的肾癌疫苗研究奠定了基础。