稳定高效表达人血栓调节蛋白的CHO细胞株的建立

• 作者: 何淑雅 周翠兰 廖端芳 郭紫芬
• 来源期刊: 中国临床药理学与治疗学
• 关键词: 人血栓调节蛋白 CHO细胞 稳定转染 表达
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1214-1219
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q812
• 语种: 中文

摘要

目的:构建稳定高效表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的CHO细胞株,以便于大量生产纯化hTM蛋白.方法:利用脂质体li-pofectamine 2000将包含hTM基因全长序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞.转染后用G418的选择性培养液筛选、挑取抗性克隆.采用流式细胞术和Western b1otting检测hTM在CHO细胞膜表面的表达情况,筛选建立稳定高效表达hTM的CHO细胞株并对其稳定性进行观察.结果:重组表达质粒pThr402转染CHO细胞后,流式细胞术证实hTM稳定高效表达于随机挑选的5个抗性克隆细胞株的细胞膜表面,但表达量有差异.Western blotting分析检测显示hTM表达量较高的CHO-TMl、CHO-TM4与CHO-TM5细胞株的细胞裂解液出现了与预期值相符的约105000的特异性条带.CHO-TM5已经经过冻存复苏前后各20次传代,且无论有无G418选择压力存在,hTM表达水平无明显差异.结论:成功构建了稳定高效表达hTM的CHO细胞株,可望获得大量蛋白,为进一步研究hTM的生物学功能以及制备和筛选抗hTM的单抗开辟新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何淑雅	南华大学生物化学教研室	94	346	9.0	14.0
2	廖端芳	南华大学药物药理研究所	190	1734	19.0	31.0
3	周翠兰	南华大学药物药理研究所	13	48	4.0	6.0
4	郭紫芬	南华大学药物药理研究所	32	133	7.0	9.0