人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定

• 作者: 张扬 王应 裴晓磊 马靖
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: PC3-分泌微量蛋白,人 CHO细胞 遗传,重组 基因表达 分离和提纯
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 669-675
• 页数: 7页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2014.05.001

摘要

目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础.方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMP-myc/His片段,插入pMH3表达载体.利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株.以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性.结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株.镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95％以上且具有生物学活性.结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具.