人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

• 作者: 张颖妹 施群 狄春辉 赵辰 钟英成 马大龙 黄大无
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 大肠杆菌 钙磷脂结合蛋白V/代谢 脱噬作用
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 167-169
• 页数: 3页
• 分类号: R939.91
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-167X.2001.02.019

摘要

目的：为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法：利用RT-PCR技术从人外周血单核细胞系U937 cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ) cDNA，并克隆到大肠杆菌表达载体中，在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2 Annexin Ⅴ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化，可除去MS2细菌蛋白，再经离子交换层析纯化，可得成熟的Annexin Ⅴ纯品,FITC标记后的Annexin Ⅴ可用于细胞凋亡的检测。结果：在大肠杆菌表达的人重组Annexin Ⅴ占菌体蛋白的56 %，经纯化获得99 %纯度的非融合型Annexin Ⅴ， FITC标记的Annexin Ⅴ能有效地检测凋亡细胞。结论：成功地建立了批量获取Annexin Ⅴ的技术路线，为推广高效检测凋亡技术提供了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马大龙	北京大学基础医学院免疫学系	71	944	16.0	28.0
2	狄春辉	北京大学基础医学院免疫学系	7	166	5.0	7.0
3	钟英成	北京大学基础医学院免疫学系	6	70	4.0	6.0
4	施群	北京大学基础医学院免疫学系	2	6	2.0	2.0
5	张颖妹	北京大学基础医学院免疫学系	24	343	10.0	18.0
6	黄大无	北京大学基础医学院免疫学系	5	25	3.0	5.0
7	赵辰	北京大学基础医学院免疫学系	2	2	1.0	1.0