腈水合酶在大肠杆菌中的表达纯化

• 作者: 周全伟 王筱兰 黄伟波 黎常宏
• 来源期刊: 江西科学
• 关键词: 诺卡氏菌 腈水合酶 重组质粒 诱导表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3679.2010.01.014

摘要

微生物的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂,广泛应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成.通过PCR扩增得到诺卡氏菌的腈水合酶基因.实验先构建得到BL21-pGEX-4T-1/NHase重组菌,表达GST-NHase融合蛋白.由于GST的相对分子质量较大,阻碍了腈水合酶的β亚基与α亚基的正确结合,从而使腈水合酶表现不出酶活.于是又构建了BL21-pET-30c/NHase重组菌,IPTG诱导表达结果显示,腈水合酶α亚基基本没有得到表达,影响了腈水合酶的活性.经生物信息学分析发现,腈水合酶α亚基的起始密码子为gtg,可能不易被大肠杆菌的RNA聚合酶识别,于是通过点突变将gtg替换成atg,阳性重组子经IPTG诱导表达,结果显示腈水合酶β亚基和α亚基的表达量都有所提高.诱导表达的菌液经超声破碎,离心得到粗酶液,用EPI-30-ARG-IDA-Co2+亲和载体纯化带6×His tag的腈水合酶,气相色谱法检测腈水合酶的酶活达到200 U/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王筱兰	江西师范大学生命科学学院	27	79	6.0	8.0
2	黄伟波	江西师范大学生命科学学院	4	20	1.0	4.0
3	黎常宏		4	3	1.0	1.0
4	周全伟	江西师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0