人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达

• 作者: 杨娥 楚雍烈 胡刚 董伟 董晓慧 郑建武
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 杀菌/渗透增强性蛋白 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-14
• 页数: 4页
• 分类号: R373.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2006.01.003

摘要

目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白.方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体.将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白.应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性.结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒.转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白.计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%.Western-blot检测显示表达产物具有特异性.结论成功构建了PET BPI193重组表达质粒.在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白.