重组人细胞角蛋白9cDNA的原核表达及纯化

• 作者: 侯卫坤 周艳 孟列素 张英 王博 王林玉 蔡永松 韩燕
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 原核表达系统 细胞角蛋白9 融合蛋白 细胞骨架
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 502-506
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201704007

摘要

目的 克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定.方法 从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达.表达的融合蛋白通过Ni2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合.结论 成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9.