人白介素24 cDNA克隆、突变纠正和原核表达

• 作者: 丁嵩涛 刘革力 宋方洲 易发平 李成华 袁成福 陈济 魏丽丽
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 白介素24 二次PCR 突变纠正 融合蛋白 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 130-133
• 页数: 4页
• 分类号: R730.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2007.02.004

摘要

目的 获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24.方法 以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达.结果 通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达.结论 IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白.