玉米磷酸丙糖异构酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 张彬 李红英 苏彦冰 韩渊怀 马芳芳
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 玉米 磷酸丙糖异构酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 381-386,438
• 页数: 7页
• 分类号: S513|Q78
• 语种: 中文

摘要

为克隆玉米（Zea mays L ．）磷酸丙糖异构酶基因 ZmT PI ，并进行序列分析和原核表达研究，根据玉米 T PI 基因的 cDNA 全长序列设计特异引物，以玉米叶片总 RNA 为模板，采用 RT‐PCR 方法扩增得到了约750 bp 的基因编码区 cDNA 片段，T ／A 克隆后进行了序列测定及序列分析，随后将克隆到的该基因片段构建到原核表达载体 PGEX‐4T‐1上，得到的重组表达质粒 GST‐ZmTPI 转化 Bl21进行融合蛋白的诱导表达及纯化。结果显示，玉米 ZmT PI （GenBank ：EU959275）cDNA 全长1216 bp ，753 bp 开放阅读框编码250个氨基酸，推测分子量26.7205 kDa ，理论等电点为5.12；该蛋白具有高度保守的 TIM 结构域，与其它高等植物的同源蛋白有很高的相似性；进化树分析表明，玉米 TPI 与甘蔗亲缘关系最近，处于同一进化支；SDS‐PAGE 检测结果显示，成功诱导表达并且纯化了与预期大小一致的融合蛋白。玉米 ZmTPI 蛋白的基因克隆和原核表达及纯化的成功，为进一步研究目的蛋白的酶活性质及生物学功能奠定了基础。