甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSB的克隆及原核表达

• 作者: 廖青 李双喜 李杨瑞 桂意云 汪淼 秦翠鲜 陈忠良 黄东亮
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 甘蔗 蔗糖磷酸合成酶 SofSPSB 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 545-551
• 页数: 7页
• 分类号: S566.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.4.545

摘要

[目的]克隆甘蔗B家族SofSPSB基因并进行原核表达,为进一步研究甘蔗SPS酶学特性及SPS活性调控机制奠定基础.[方法]在进化分析的基础上,通过同源克隆获得甘蔗SofSPSB基因部分序列,再结合RACE技术获得全长cDNA序列.扩增SofSPSB基因ORF并连到原核表达载体pETBlue-2上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.[结果]通过比对B家族中进化关系很近的玉米(Zea mays)ZmSPS1和水稻(Oryza sativa) OsSPS1基因序列,并在保守区设计一对引物扩增获得甘蔗B家族SPS基因(SofSPSB) 2330 bp序列.结合5'-RACE和3'-RACE技术获得3481 bp SofSPSB基因全长cDNA序列,该序列包含一个3225 bp的开放阅读框(ORF)；起始密码子(ATG)位于转录起始位点后56 bp处,终止密码子(TGA)后有一段201 bp的非编码序列,并带有真核生物典型的polyA尾巴；编码1074个氨基酸,SofSPSB与Zm-SPS1、OsSPS1的核苷酸序列同源性分别为94.7％和81.3％,氨基酸序列同源性分别为96.0％和83.9％；其理论分子量Mw=118.96 kDa,等电点pI=6.30.经原核表达后纯化获得带6×His标签的融合蛋白.[结论]克隆获得甘蔗B家族Sof-SPSB基因全长cDNA序列,成功构建了SofSPSB基因原核表达载体,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.