三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达

• 作者: 何怡宁 唐宁 张志鹏 曹艳杰 王海勇 磨美兰 谢智文 韦天超 韦平
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 三黄鸡 干扰素基因刺激蛋白(STING) 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1401-1405
• 页数: 5页
• 分类号: S831.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.08.1401

摘要

[目的]克隆鸡干扰素基因刺激蛋白(STING)胞外区基因并进行原核表达,为了解STING蛋白的生物学功能及探讨禽类的固有免疫机制打下基础.[方法]采用RT-PCR扩增鸡STING胞外区基因,与原核表达载体pGEX-4T-1连接构建重组表达质粒,再转化BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行12％ SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析.[结果]三黄鸡STING胞外区基因全长951 bp,与原核表达载体pGEX-4T-1可成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-STING,转化BL21 (DE3)感受态细胞后经1.0 mmol/L IPTG诱导表达4h,12％ SDS-PAGE电泳检测得到一个带GST标签约62 ku的融合蛋白,采用抗GST多克隆抗体进行Western blotting鉴定,约在62 ku处可见一条明显的蛋白印迹条带,表明目的蛋白原核表达正确,且特异性较高.[结论]从三黄鸡外周血淋巴细胞中克隆获得的STING胞外区基因片段可在原核细胞中高效表达,且纯化后的融合蛋白可用于制备鸡STING多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韦平	广西大学动物科学技术学院	310	2120	22.0	32.0
2	磨美兰	广西大学动物科	90	775	16.0	24.0
3	韦天超	广西大学动物科学技术学院	68	464	12.0	18.0
4	何怡宁	广西大学动物科学技术学院	16	52	5.0	6.0
5	谢智文	广西大学动物科学技术学院	6	23	3.0	4.0
6	曹艳杰	广西大学动物科学技术学院	4	1	1.0	1.0
7	王海勇	广西大学动物科学技术学院	4	9	2.0	3.0
8	唐宁	广西大学动物科学技术学院	4	7	1.0	2.0
9	张志鹏	广西大学动物科学技术学院	4	1	1.0	1.0