猪PD-1胞外区基因的克隆及原核表达

• 作者: 孙国鹏 岳锋 张艳芳 朱艳平 杨媛 王选年 银梅
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪PD-1 胞外区 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 55-59
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|S858.28
• 字数: 3756字
• 语种: 中文

摘要

为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α.挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33 ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别.本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料.