西藏小型猪Leptin及其受体胞外区片段的克隆及原核表达

• 作者: 刘玉鹏 吴丽红 施振旦 王丛莉 范沛 顾为望 黄黎珍
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猪瘦素 猪瘦素受体 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 28-32
• 分类号: R332
• 字数: 4805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2011.07.006

摘要

目的 克隆及原核表达西藏小型猪瘦素(Leptin)成熟肽及瘦素受体胞外区片段.方法 根据西藏小型猪瘦素序列(GenBank号:GQ240885.1)和猪瘦素受体基因胞外域序列(GenBank号:AF167719.1)分别设计并合成两对引物扩增瘦素、瘦素受体基因胞外域编码区1654-2319位片段,以西藏小型猪组织总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片段.再以该两个特异性片段为模板,另外设计两对带有BanH Ⅰ和HidⅢ酶切位点的套式引物分别扩增瘦素64-504位(成熟肽编码区)和瘦素受体基因胞外域编码区1655-2314位的cDNA片段,将该两片段克隆入pMD<,18>-T载体并转化感受态细菌E.coli DH5α测序并永久保存.此两片段经酶切后克隆到表达载体pRSET A的BamH Ⅰ和HindⅢ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-OB和pR-OBR-a并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物.结果 在IPTG诱导下促使重组菌pR-OB表达了相对分子质量约18×10<'3>左右的融合蛋白;重组菌pR-OBR-a表达了相对分子质量约27×10<'3>左右的融合蛋白.结论 说明重组质粒pR-OB、pR-OBR-a在大肠杆菌BL21(DE3)中分别可表达西藏小型猪瘦素成熟肽、瘦素受体片段蛋白,为进一步研究瘦素、瘦素受体功能和应用提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾为望	南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所	149	929	15.0	22.0
2	施振旦	华南农业大学动物科学学院	76	873	18.0	24.0
3	刘玉鹏	华南农业大学动物科学学院	5	7	2.0	2.0
4	范沛	南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所	7	26	2.0	5.0
5	黄黎珍	南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所	8	55	4.0	7.0
6	吴丽红	南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所	3	20	2.0	3.0
7	王丛莉	华南农业大学动物科学学院	2	13	2.0	2.0