人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备

• 作者: 刘朝奇 史继静 吕佰瑞 李斌 王梦瑶 王见之 覃晓琳 韩琴
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,PD-L1 基因表达 抗体
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 997-999
• 分类号: R34-33
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础.方法 用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性.用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105.结论 鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
2	史继静	三峡大学分子生物学研究所	19	94	6.0	9.0
3	覃晓琳	三峡大学分子生物学研究所	23	62	4.0	7.0
4	李斌	三峡大学分子生物学研究所	20	89	4.0	9.0
5	吕佰瑞	三峡大学分子生物学研究所	14	30	3.0	5.0
6	王见之	三峡大学分子生物学研究所	4	4	1.0	2.0
7	王梦瑶	三峡大学医学院临床医学系	1	1	1.0	1.0
8	韩琴	三峡大学医学院临床医学系	1	1	1.0	1.0