表皮生长因子受体胞外区的原核表达和鉴定

• 作者: 张兴梅 李妍 石玉生
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮生长因子受体 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1891-1893
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2255字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2007.12.001

摘要

目的 克隆表皮生长因子受体(EGFR)胞外区段基因序列(EGFR ECD),构建重组融合表达载体.方法 采用常规PCR方法 扩增EGFR的胞外区DNA序列,并将扩增产物克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-1/EGFRECD,转化BL21(DE3)宿主菌;采用Sal Ⅰ和Not Ⅰ双酶切和序列分析鉴定插入序列的正确性:并用IPTG诱导工程菌,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达.结果 双酶切鉴定表明,EGFR胞外区序列已经正确克隆到GST融合表达载体中,测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致.SDS-PAGE电泳显示,融合蛋白在BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-EGFRECD的表达量占菌体总蛋白的12%左右.经Western blotting分析证实,重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别.结论 本试验成功克隆了EGFR胞外区DNA序列,构建了融合表达载体,并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFR功能及免疫学研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李妍	南方医科大学生物技术学院	47	170	6.0	10.0
2	张兴梅	南方医科大学基础医学院神经生物教研室	33	71	4.0	7.0
3	石玉生	南方医科大学南方医院放疗科	30	110	6.0	8.0