人GLUT4基因的克隆及原核表达的初步实验研究

• 作者: 刘晓宇 孙脊峰 张菊 焦凯
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: GLUT4 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 108-110,123
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2004.02.002

摘要

目的通过反转录聚合酶链方法,从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子4(GLUT4)cDNA基因,并分别克隆入测序载体、表达载体,获得具有正确序列的目的基因及其原核表达产物,为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定物质基础.方法经GenBank在线检索,设计、确定人GLUT4 cDNA基因特异引物,采用反转录聚合酶链(RT-PCR)方法从一例手术的人新鲜腹部肌肉组织总RNA模板中,获得人GLUT4表达片段cDNA的基因,经克隆入测序载体pGEM-3zf(-)测序,验证cDNA大小、完整性及序列.再克隆入表达载体pBV220,经温度诱导,在E.coli获得表达.结果以设计的特异引物,从人肌肉组织模板中能得到预期大小完整的人GLUT4 cDNA基因,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列与目的基因的序列相符.所获GLUT4 cDNA基因插入原核非融合表达载体pBV220,获得预期大小的重组表达产物.结论从人肌肉组织中能获得具有正确序列、含完整起始及终止密码的人GLUT4 cDNA基因.该人GLUT4 cDNA基因的体外重组体能在原核表达系统表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙脊峰	第四军医大学唐都医院肾内科	67	330	10.0	16.0
2	张菊	第四军医大学基因诊断研究所	79	357	10.0	14.0
3	焦凯	第四军医大学唐都医院内分泌科	76	488	11.0	18.0
4	刘晓宇	第四军医大学唐都医院内分泌科	4	25	1.0	4.0