毛竹丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白基因克隆、原核表达及纯化

• 作者: 屈亚平 张智俊 王蕾 王超莉
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 植物学 毛竹 丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 749-755
• 页数: 7页
• 分类号: S718.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.2015.05.014

摘要

丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白(pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins,RP)是通过调控丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate,orthophosphate dikinase,PPDK)参与C4途径光合碳循环途径.毛竹Phyllostachys edulis作为一种重要的经济竹种,分析克隆RP基因对于竹类植物光合作用的研究具有重大理论和应用价值.通过逆转录实时聚合酶链式反应(RT-PCR)成功克隆得到毛竹PeRP1,该基因cDNA全长1 275 bp,编码425个氨基酸;经生物信息学预测,该蛋白属于kinase-PPPase超家族,主要含有UDF 299保守结构域;经多序列比对发现毛竹PeRP1蛋白与C3植物中RP1亲缘关系较近,而与C4植物亲缘关系较远.为了研究PeRP1的蛋白质结构,我们将PeRP1蛋白进行原核表达,利用Ni-NTA树脂亲和层析结合分子筛(SEC)层析的方法纯化得到了PeRP1重组蛋白.SEC纯化的结果表明:PeRP1蛋白在溶液中主要以多聚体形式存在,二聚体及单体含量较少,推测PeRP1蛋白可能以多聚体形式参与调控PPDK蛋白.这为今后研究该蛋白的结构与功能打下了良好基础.