籽粒苋C4关键酶丙酮酸磷酸双激酶基因的原核表达及酶活性测定

• 作者: 冯瑞云 张维锋 白云凤 贺飞燕 闫建俊
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 籽粒苋 AhPPDK 原核表达 酶活测定
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 页码范围: 61-65
• 页数: 5页
• 分类号: S330|Q78
• 字数: 3938字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2017.02.010

摘要

为了进一步探究籽粒苋丙酮酸磷酸双激酶(AhPPDK)蛋白的作用机制,构建了AhPPDK基因的原核表达载体,通过碱裂解提取质粒,经限制性内切酶酶切,采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物,选择正确表达的阳性重组子,将测序正确的重组质粒pEASY-E1-AhPPDK转化菌株Transetta(DE3);利用IPTG诱导蛋白表达.SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组AhPPDK能在大肠杆菌Transset(DE3)中高效表达,表达的重组蛋白质分子量约为108 kDa,与预期分子量相符,且为可溶性蛋白.利用紫外分光光度法测量结果表明,原核表达的AhPPDK具有酶活性,且上清粗酶液活性高于沉淀粗酶液.研究结果可为进一步探明AhPPDK蛋白的作用机制和转基因利用奠定基础.