人白介素24融合载体的构建、突变纠正和表达优化

• 作者: 宋德贵 范秋丽
• 来源期刊: 广西师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 人白介素24 原核表达 二次PCR 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 页码范围: 150-155
• 页数: 6页
• 分类号: Q51
• 字数: 2916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16088/j.issn.1001-6600.2016.01.024

摘要

以武汉大学病毒学国家重点实验室保存的白介素24 (IL-24)为模板,构建原核表达载体pET28a-IL-24,转化大肠杆菌DH5α,挑取单克隆,测序结果显示:在IL-24第18位A→G,21位C→T,412位G→A,18位和21位的突变没有使该位上的氨基酸发生改变,而412位的突变导致了该位点上的氨基酸发生改变——由丙氨酸A变为苏氨酸T.通过设计突变引物,二次PCR将其纠正,转化大肠杆菌BL21.通过改变诱导剂IPTG的浓度、诱导时间和诱导温度摸索最佳诱导条件,SDS-PAGE、Western blot检测显示有融合蛋白6his-IL-24表达.结果表明:通过二次PCR成功构建了IL-24原核表达载体,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳诱导温度为28℃,最佳诱导剂浓度为1 mmol/L,最佳诱导时间是8h.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋德贵	广西师范大学生命科学学院	23	130	7.0	10.0
2	范秋丽	广西师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0