幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化

• 作者: 向廷秀 姜政 杨丽娟 王丕龙 陶小红
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 幽门螺杆菌 尿素通道蛋白(UreI) 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 504-507,534
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 语种: 中文

摘要

目的 构建幽门螺杆菌(H.pylori, Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coli BL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础.方法 利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的 基因UreI与载体pET32a(+)分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接.筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a(+)/UreI融合蛋白.表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析.结果 经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417609序列完全一致,无碱基突变.经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a(+)/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性.结论 成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a(+)/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丕龙	重庆医科大学附属第一医院消化内科	151	971	16.0	24.0
2	陶小红	重庆医科大学附属第一医院消化内科	82	426	11.0	16.0
3	姜政	重庆医科大学附属第一医院消化内科	117	472	10.0	15.0
4	向廷秀	重庆医科大学附属第一医院消化内科	53	224	7.0	12.0
5	杨丽娟	重庆医科大学附属第一医院消化内科	7	1	1.0	1.0