幽门螺杆菌硫氧还蛋白-1基因克隆及其重组蛋白表达与活性测定

• 作者: 丁士刚 张婷 张静 王晔 石岩岩 鲁凤民
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 幽门螺杆菌 硫氧还蛋白质类 重组蛋白质类 遗传载体
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 190-194
• 页数: 5页
• 分类号: R318.14
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2014.02.003

摘要

目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,构建含有该目的基因的原核细胞表达载体,表达纯化该蛋白,并检测该蛋白活性.方法:以Hp国际标准菌株26695的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法扩增Hp Trx1的cDNA,连接至pEASY-T1载体构建成pEASY-T1-Hp Trx1.对pEASY-T1-Hp Trx1进行双酶切后将目的片段连接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重组质粒,并在大肠杆菌BL21 plys S中进行表达.应用镍柱亲和层析纯化重组的Hp Trx1蛋白,并检测其二硫键还原酶的活性.结果:测序结果显示Hp Trx1 cDNA成功连入pET-30a质粒,且与GenBank(HP0824)完全一致.含质粒pET-30a-Hp Trx1的大肠杆菌BL21 plys S成功表达出Hp Trx1蛋白,活性检测显示重组Hp Trx1蛋白具有二硫键还原酶的活性.结论:成功构建原核表达载体pET-30a-Hp Trx1,并表达、纯化出有活性的Hp Trx1蛋白,为进一步研究Hp Trx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张静	北京大学第三医院消化科	216	2159	26.0	41.0
2	丁士刚	北京大学第三医院消化科	141	1812	23.0	36.0
3	王晔	北京大学第三医院消化科	44	509	12.0	21.0
4	张婷	北京大学基础医学院病原生物学系	60	276	10.0	12.0
5	鲁凤民	北京大学基础医学院病原生物学系	61	269	7.0	13.0
6	石岩岩	北京大学第三医院消化科	40	127	6.0	10.0