人canstatin基因克隆及其重组蛋白表达

• 作者: 何小平 屠振兴 李兆申 潘雪 金晶 高军 龚燕芳
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: canstatin 血管生成 基因克隆
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 587-591
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 语种: 中文

摘要

目的克隆人血管能抑素canstatin基因,重组表达canstatin蛋白.方法从人胎盘组织中提取总RNA做模板,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增canstatin cDNA,转入克隆载体pUCm-T,再转化E.coli DH5α,挑选阳性克隆,测定基因序列.酶切克隆载体目的基因,插入表达载体pET-22b(+),转化E.coli BL21,诱导表达重组蛋白.结果RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳证实与目的基因长度一致.RT-PCR产物与pUCm-T的连接产物转化E.coli DH 5α,篮白斑筛选后,选6个白色菌落做酶切鉴定,证实其中1个为阳性克隆,测序结果与GenBank公布的canstatin基因序列完全一致.将pUCm-T上目的基因片段酶切后插入pET-22b(+),转化E.coli BL21,挑选7个菌落做酶切鉴定,证实均为阳性克隆.IPTG诱导其中1个克隆表达重组蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明在相对分子质量24 000左右出现新的蛋白条带.结论成功克隆出canstatin基因,重组表达出canstatin蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学长海医院消化内科	1030	7581	34.0	55.0
2	屠振兴	第二军医大学长海医院消化内科	90	564	13.0	20.0
3	龚燕芳	第二军医大学长海医院消化内科	120	602	12.0	17.0
4	潘雪	第二军医大学长海医院消化内科	28	141	6.0	11.0
5	高军	第二军医大学长海医院消化内科	91	287	9.0	10.0
6	金晶	第二军医大学长海医院消化内科	47	145	7.0	8.0
7	何小平	第二军医大学长海医院消化内科	3	8	2.0	2.0