小鼠组织因子原核质粒的构建和重组蛋白的表达

• 作者: 王华 谭光宏 陈少兴 黄用豪 黄风迎 黎岳南
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 组织因子 重组蛋白质 原核表达载体 小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1486-1488
• 页数: 3页
• 分类号: R349.52
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2009.16.009

摘要

目的 体外扩增小鼠组织因子基因cDNA序列,构建小鼠组织因子重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达.方法 根据基因库提供的基因序列设计克隆扩增小鼠组织因子cDNA基因序列的引物,利用原位反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增获得小鼠组织因子cDNA基因,通过内切酶酶切和T7酶连接,将小鼠组织因子cDNA序列插入原核表达质粒pQE30多克隆位点中.筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定证实正确后,转染感受态大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹法进行鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳发现扩增的小鼠组织因子cDNA序列相对分子量大小和预期值相一致,重组质粒酶切结果和预期值相符,DNA序列测定显示质粒的目的基因阅读框架准确无误.用IPTG诱导可以有效诱导重组蛋白质在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白质相对分子量与预期值相一致.结论 成功构建了小鼠组织因子的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导了有效表达,为将组织因子应用于治疗和功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭光宏	海南医学院海南省热带病重点实验室	43	127	8.0	9.0
2	黄风迎	海南医学院海南省热带病重点实验室	26	48	4.0	5.0
3	王华	海南医学院海南省热带病重点实验室	19	47	3.0	6.0
4	黄用豪	海南医学院海南省热带病重点实验室	25	52	3.0	6.0