猪和小鼠endoglin原核表达载体的构建及重组蛋白的诱导表达和纯化

• 作者: 田聆 谭光宏 魏于全 黄风迎
• 来源期刊: 海南医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Endoglin 重组蛋白质 原核表达载体
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 系列研究成果报道
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q754
• 字数: 4464字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-1237.2006.01.001

摘要

目的:体外扩增猪和小鼠endoglin胞外段基因序列,构建猪和小鼠endoglin重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定.方法:设计猪和小鼠endoglin胞外段基因序列的引物,利用RT-PCR技术扩增克隆猪和小鼠endoglin胞外段基因序列,通过限制性核酸内切酶酶切,然后用T7酶连接,构建猪和小鼠endoglin胞外段的原核表达质粒pQE-pEDG和pQE-mEDG.筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确后,再转染感受态大肠杆菌JM109,用IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA亲合层析进行分离纯化,最后用SDS-PAGE和免疫印迹法进行鉴定.结果:琼脂糖凝胶电泳发现扩增克隆的猪和小鼠endoglin胞外段基因序列分子量大小和预期值相一致,酶切分析显示,pQE-pEDG和pQE-mEDG和预期值相符,DNA序列测定显示,目的基因片段和阅读框架正确无误.重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,表达的重组蛋白分子量与预期值相一致,纯化的蛋白浓度达90%以上,抗小鼠endoglin抗体可特异性识别pEDG和mEDG.结论:成功构建了猪和小鼠endoglin的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达并纯化,为进一步了解重组endoglin蛋白质作为疫苗是否可以有效诱导产生抗自身endoglin的免疫反应奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭光宏	海南医学院海南省热带病重点实验室	43	127	8.0	9.0
2	黄风迎	海南医学院海南省热带病重点实验室	26	48	4.0	5.0