OjCHS原核表达载体的构建及重组蛋白的纯化

• 作者: 乙引 孙威 彭贵 林建 申欢 鞠志刚 马玲
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 日本蛇根草 查尔酮合酶基因 原核表达载体 蛋白表达与纯化
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 1102-1106
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|Q512
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20190102.023

摘要

查尔酮合酶 (chalconesynthase, CHS) 是类黄酮生物合成过程中的第一个关键酶, 也是限速酶, 它直接影响并限制类黄酮的合成与积累.在克隆得到日本蛇根草CHS基因 (Oj CHS) 基础上, 将该基因插入原核表达载体pET-28a, 完成重组表达质粒pET28a-CHS的构建.随后, 利用冻融法将上述质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞中用于重组蛋白的表达.选择不同IPTG浓度、诱导温度及诱导时间对重组菌进行诱导, 确定了可溶性重组蛋白的最佳诱导表达条件.最后, 通过洗脱、纯化、透析与浓缩完成重组蛋白的纯化.结果显示, 成功构建原核表达载体pET28a-CHS, 可溶性重组蛋白最佳诱导条件为:IPTG浓度0.45 mmol·L-1, 25℃下诱导12 h.最后大量制备并纯化获得符合预期大小的可溶性蛋白, 为深入研究Oj CHS的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乙引	贵州师范大学生命科学学院	194	1671	21.0	30.0
2	孙威	贵州师范大学生命科学学院	8	7	2.0	2.0
3	鞠志刚	贵阳中医学院药学院	9	2	1.0	1.0
4	林建	贵州师范大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
5	申欢	贵州师范大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
6	彭贵	贵州师范大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
7	马玲	贵州师范大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0