DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化

• 作者: 孙沫逸 李建虎 李连科 杨耀武 邵小钧 陈伟
• 来源期刊: 中国美容医学
• 学科: 生物学
• 关键词: p12DOC-1蛋白 口腔癌缺失 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 447-450
• 页数: 4页
• 分类号: Q813.1
• 字数: 3208字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6455.2007.04.005

摘要

目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白.方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD 18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化E.ColiBL21,用IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B柱亲和层析纯化重组蛋白.结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC-1长度一致,测序结果与GenBank公布的DOC-1基因序列完全一致,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量38 000左右出现新的蛋白表达条带,经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白.结论:成功构建了pGEX-4T-1-DOC-1原核表达载体,表达并纯化出GST-p12重组蛋白,为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙沫逸	第四军医大学口腔医院颌面外科	86	504	11.0	16.0
2	陈伟	第四军医大学口腔医院颌面外科	17	107	6.0	9.0
3	李建虎	第四军医大学口腔医院颌面外科	41	227	9.0	11.0
4	杨耀武	第四军医大学口腔医院颌面外科	58	350	10.0	15.0
5	李连科	解放军第322医院口腔科	6	14	2.0	3.0
6	邵小钧	第四军医大学口腔医院颌面外科	3	19	3.0	3.0