DOC-1R基因表达载体的构建及其重组蛋白的表达纯化

• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: DOC-1R 基因表达 基因克隆 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 521-525
• 页数: 5页
• 分类号: Q816
• 字数: 4143字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2009.06.011

摘要

目的 构建DOC-1R(deleted in oral cancer-1 related)的原核表达载体并且纯化其重组蛋白,用于进一步研究DOC-1R蛋白的结构与功能.方法 采用基因重组技术构建原核表达载体pGEX-DOC-1R,经DNA测序鉴定后,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达并纯化融合蛋白.结果 以菌落PCR及限制性内切酶酶切鉴定得到候选阳性克隆,测序结果表明所得到的克隆序列及开放阅读框架完全正确,IPTG诱导后SDS-PAGE电泳分析表明在40 kD处出现特征蛋白表达带,经磁珠亲合层析后Western印迹检测证实得到较高纯度的GST-p14~(DOC-1R)融合蛋白.结论 成功构建了pGEX-DOC-1R的原核表达载体,表达并纯化出GST-p14~(DOC-1R)融合蛋白,为DOC-1R抗体制备及研究DOC-1R蛋白结合蛋白及其在细胞周期调控中的生物学功能奠定了基础.