脂联素原核表达载体PQE30/ADPN的构建及其表达与纯化

• 作者: 林丽香 温俊平 胡雅婷 陈刚
• 来源期刊: 西北药学杂志
• 关键词: 脂联素 基因表达 大肠杆菌 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 生物制药
• 页码范围: 488-490
• 页数: 3页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-2407.2009.06.032

摘要

目的 构建大鼠全长脂联素(fAd)和球状域脂联素(gAd)重组表达载体PQE30/ADPN,并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白,对表达产物进行纯化和鉴定.方法 将纯化的脂联素克隆产物与原核表达载体PQE30通过双酶切方法位点特异地连接在一起,再转化入大肠杆菌M15感受态细胞中,并用IPTG诱导表达,并通过亲和层析、去盐、去除内毒素等纯化蛋白.结果 PCR获得长度分别为684 bp(fAd)和402 bp(gAd)的目的 片段,经PQE30原核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的 片段与GenBank中脂联素序列(序列号:NM_144744)完全一致;含重组脂联素质粒的大肠杆菌在30 ℃经0.5 mmol·L-1 IPTG诱导6 h时,可溶性蛋白表达量最高.结论 成功克隆大鼠脂联素基因,并在大肠杆菌中获得有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈刚	福建医科大学省立临床医院内分泌科	63	170	7.0	8.0
2	胡雅婷	福建医科大学省立临床医院内分泌科	2	5	1.0	2.0
3	温俊平	福建医科大学省立临床医院内分泌科	22	103	6.0	9.0
4	林丽香	福建医科大学省立临床医院内分泌科	29	82	6.0	8.0