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人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测
人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测
作者:
丁玉静
于德民
刘德敏
孙颖
杨莉丽
原文服务方:
天津医药
脂联素
克隆,分子
基因表达
肝细胞
重组蛋白质类
葡糖-6-磷酸酶
大肠杆菌
摘要:
目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人脂联素蛋白.方法:利用PCR技术扩增人脂联素基因完全编码序列,选用Gateway原核表达体系,经过BP反应、LR反应两步反应,将PCR产物克隆入pET-DEST42质粒,构建融合表达载体pET-DEST42/attB-adiponectin,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达脂联素融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,NDSB201高效复性后,使重组蛋白作用于体外培养的肝细胞,RT-PCR法检测重组脂联素对肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶转录水平的影响.结果:成功构建了表达载体pET-DEST42/attBadiponectin,DNA序列测定结果与预期一致.IPTG诱导表达的融合蛋白经纯化后Western Blot鉴定具有人脂联素抗原性,并可使培养的肝细胞中葡萄糖-6-磷酸酶转录水平下降.结论:获得具有生物学活性的重组人脂联素为进一步研究脂联素的生理机制奠定了基础.
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文献信息
篇名
人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测
来源期刊
天津医药
学科
关键词
脂联素
克隆,分子
基因表达
肝细胞
重组蛋白质类
葡糖-6-磷酸酶
大肠杆菌
年,卷(期)
2007,(9)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
644-646
页数
3页
分类号
R9
字数
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.0253-9896.2007.09.002
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
刘德敏
65
342
10.0
14.0
2
于德民
140
1022
16.0
26.0
3
孙颖
17
58
5.0
6.0
4
杨莉丽
2
4
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2.0
5
丁玉静
3
17
2.0
3.0
传播情况
被引次数趋势
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版权信息
全文
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节点文献
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(0)
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二级参考文献(1)
1997(2)
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2010(1)
引证文献(1)
二级引证文献(0)
2011(2)
引证文献(2)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
脂联素
克隆,分子
基因表达
肝细胞
重组蛋白质类
葡糖-6-磷酸酶
大肠杆菌
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
天津医药
主办单位:
天津市医学科学技术信息研究所
出版周期:
月刊
ISSN:
0253-9896
CN:
12-1116/R
开本:
大16开
出版地:
天津市和平区贵州路96号D座《天津医药》编辑部
邮发代号:
创刊时间:
1959-01-01
语种:
chi
出版文献量(篇)
9550
总下载数(次)
0
总被引数(次)
34139
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