人脂联素球状结构域基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 安薇 徐霞
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂联素球状结构域 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 823-827
• 分类号: Q78
• 字数: 4772字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.09.014

摘要

目的:构建人脂联素球状结构域(gAd)基因的原核表达载体PET-28a(+)-gAd,诱导表达并纯化重组gAd蛋白,制备多克隆抗体.方法:以人基因组为模板,用PCR方法扩增人脂联素球状结构域(gAd)基因,构建原核表达载体PET-28a(+)-gAd,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经SDS-PAGE,免疫印迹法检测并鉴定表达产物,表达的目的蛋白用镍亲和层析柱纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.结果:原核表达载体PET-28a(+)-gAd转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,获得gAd重组蛋白,免疫印迹证实能与抗his标签检测抗体结合,制备的多克隆抗体经间接ELISA法测得效价为1∶32 000.免疫印迹证实,抗血清不仅能特异性地识别gAd蛋白,还能识别脂联素蛋白,而不与非特异性蛋白结合.结论:成功构建原核表达载体PET-28a(+)-gAd,并表达、纯化重组蛋白gAd,制备的多克隆抗体特异性好,效价较高,为进一步的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐霞	广州医学院医学检验系	69	314	10.0	13.0
2	安薇	广州医学院医学检验系	3	2	1.0	1.0