犬松弛素原基因原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 任志华 余树民 夏娟 左之才 曹随忠 杨芳 沈留红 陈曦 马晓平 黄晓雅
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬 松弛素原 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 683-688
• 页数: 6页
• 分类号: S857.2+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.04.018

摘要

松弛素作为胰岛素超家族中的一种多肽激素,在生殖机能和很多非生殖生理过程中发挥重要的调控作用,而血中松弛素被看成是犬(Canis lupus)和部分其他动物妊娠的标志.为了简便高效获取犬松弛素,以及开发具有临床应用价值的犬松弛素生物制剂,本研究进行犬松弛素原基因的原核表达及制备其多克隆抗体的研究,即以包含犬前松弛素原基因cDNA的质粒pMD 19-T-Cpreprorelaxin1为材料,PCR扩增犬松弛素原基因cDNA,与表达载体pET28a连接,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL2 1(DE3),异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导重组蛋白表达,对表达产物以及纯化后重组蛋白用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot实验进行鉴定;以纯化犬松弛素原重组蛋白为免疫原,免疫家兔(Oryctolaguscuniculus)制备多克隆抗体,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗血清效价,Western blot实验分析所制备抗体的特异性.结果显示,所构建原核表达载体高表达分子量约为22kD的融合蛋白,与预期犬松弛素原蛋白的分子量一致,主要以包涵体形式存在,Western blot结果显示纯化前后的重组蛋白均与兔抗组氨酸(histidine,His)标记抗体特异性杂交;犬松弛素原重组蛋白免疫家兔后,ELISA检测抗血清效价大于1∶80 000,Western blot结果证实制备的多克隆抗体与犬松弛素原重组蛋白特异结合.本研究为犬松弛素原的功能研究和临床应用提供了理论依据.