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人L-选择素的原核表达及多克隆抗体的制备
人L-选择素的原核表达及多克隆抗体的制备
作者:
曾宪录
费君伟
费瑞
高艳光
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
L选择素
原核表达
多克隆抗体
大肠杆菌
摘要:
目的:构建人L-选择素原核表达载体,表达并纯化人L-选择素重组蛋白,制备兔抗人L-选择素多克隆抗体.方法:利用人L-选择素cDNA的N末端胞外结构区153个氨基酸的开放阅读框架(ORF),通过PCR方法扩增出人L-选择素目的片段.将扩增的基因插入表达载体pQE40的BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点之间,再经转化使其在大肠杆菌M15中表达,产生含6-His-tag的融合蛋白.融合蛋白经Ni亲合层析柱纯化和SDS-PAGE分析后,用以免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体.最后经Western blotting检测和斑点杂交(DIBA)进行抗体效价测定.结果:酶切鉴定和DNA测序显示,pQE40-L-选择素重组表达载体含有人L-选择素N末端结构区153个氨基酸的cDNA序列;通过在大肠杆菌M15中的表达和纯化分析,获得了蛋白含量为600 mg·L-1的人L-选择素蛋白;通过免疫新西兰白兔和抗体效价测定,得到抗血清效价达1:1 000的多克隆抗体.结论:人L-选择素蛋白可在M15大肠杆菌中高效表达,其多克隆抗体效价较高.
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文献信息
篇名
人L-选择素的原核表达及多克隆抗体的制备
来源期刊
吉林大学学报(医学版)
学科
医学
关键词
L选择素
原核表达
多克隆抗体
大肠杆菌
年,卷(期)
2006,(1)
所属期刊栏目
技术交流
研究方向
页码范围
145-149
页数
5页
分类号
R392.11
字数
4277字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1671-587X.2006.01.044
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
曾宪录
东北师范大学遗传与细胞研究所
32
322
9.0
17.0
2
费瑞
吉林大学基础医学院细胞生物学教研室
36
266
10.0
15.0
3
费君伟
吉林大学第一医院妇产科
7
32
4.0
5.0
4
高艳光
东北师范大学遗传与细胞研究所
3
19
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研究主题发展历程
节点文献
L选择素
原核表达
多克隆抗体
大肠杆菌
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
吉林大学学报(医学版)
主办单位:
吉林大学
出版周期:
双月刊
ISSN:
1671-587X
CN:
22-1342/R
开本:
大16开
出版地:
吉林省长春市新民大街828号
邮发代号:
12-23
创刊时间:
1959
语种:
chi
出版文献量(篇)
8631
总下载数(次)
12
总被引数(次)
34977
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