中国旱獭β2m基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 丁红晖 刘贽 杨东亮 杨新星 王宝菊 王忠东 王虎 郝友华 陆蒙吉 陈玲 陶元清
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜肝病毒 β2m基因 基因工程技术 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 283-286
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3037字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2009.04.001

摘要

目的 克隆、原核表达中国旱獭β2m基因,并制备多克隆抗体.方法 利用RT-PCR技术从中国旱獭脾细胞中扩增β2m基因,克隆至pET28a(+)质粒,构建原核表达载体pET-28a(+)-CWβ2m,再转化宿主菌Rosetta(DE3)pLacI诱导其表达.使用切胶回收纯化目的蛋白,将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验检测抗体的灵敏度和特异性.结果 克隆出的中国旱獭β2m基因,与GenBank已公布的土拨鼠的碱基序列一致;Western印迹结果显示克隆的β2m基因能在大肠埃希菌中高效表达,免疫家兔获得了高效价的多克隆抗体.结论 成功克隆了中国旱獭β2m基因,在原核宿主中进行了高效表达,获得的多克隆抗体具有较高的效价.为人工制备MHC-Ⅰ类分子复合物,深入研究嗜肝病毒感染过程中特异性CTL应答和效应机制奠定了基础.