鸡IRF7原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 叶建强 朱敏 王琳 秦爱建 许默儒 邵红霞 钱琨
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 干扰素调节因子7 多抗制备
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 其他
• 页码范围: 76-81
• 页数: 6页
• 分类号: S852.42
• 字数: 4048字
• 语种: 中文

摘要

为了制备鸡干扰素调节因子7(interferon regulatory fator 7,IRF7)抗体,本研究通过分离鸡的外周血淋巴细胞,抽提RNA并反转录获得鸡淋巴细胞cDNA,利用聚合酶链式反应扩增获得鸡IRF7基因(chIRF7),将该基因克隆入原核表达载体pCOLD-TF中,构建成pCOLD-TF-chIRF7原核表达质粒.将测序正确的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,经0.25 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导20 h.SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得高效表达,大小为107 kDa.切胶免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗鸡IRF7多克隆抗体.激光共聚焦、Western blot实验结果显示,该抗鸡IRF7多克隆抗体能与真核质粒表达的chIRF7蛋白发生特异性反应.该抗体的成功制备为进一步研究鸡IRF7的表达调控机制奠定了基础.