兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 万小颖 吴信生 施丽娟 李挺 李碧春 王文洲 秦立志
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 白细胞介素-10基因 克隆 表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 788-795
• 页数: 8页
• 分类号: Q78|S829.1
• 字数: 5264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.05.017

摘要

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应.本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体.运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达获得融合蛋白,融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性.结果表明:克隆得到了兔IL-10基因,大小为537 bp,经核苷酸测序与GenBank已登录的基因序列(NM_001082045)相似性为99％;重组载体pET-IL-10构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶56 000,且具有很高的特异性.成功实现了兔IL-10基因的原核表达,并制备了豚鼠抗兔IL-10多克隆抗体,为深入研究兔IL-10基因的功能奠定了基础.