人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

• 作者: 吴洪玉 张玲 李兆申 杜奕奇 满晓华 金晶 高军 黄文 龚燕芳
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经元正五聚蛋白2 原核表达 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 胰腺癌早期诊断专题研究
• 页码范围: 24-26
• 页数: 3页
• 分类号: R735.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.01.008

摘要

目的 在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定.方法 双酶切 pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经Not I 和EcoR I 双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性酶切、PCR和测序验证正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,采用Western blotting鉴定表达产物,亲和层析法纯化GST-NPTX2蛋白.结果 经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pGEX4T-1-NPTX2构建成功,表达产物相对分子量为70kD左右,与预期值相符,Western blotting证实该蛋白具有免疫反应特异性,亲和层析法获得了纯化的GST-NPTX2蛋白.结论 构建了pGEX-4T-NPTX2原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了GST-NPTX2融合蛋白.亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究NPTX2的生物学功能奠定了基础.