人SCG10基因原核质粒构建及其重组蛋白表达

• 作者: 刘芙蓉 张红艳 李丰 李家滨 李彦妹 苏楠
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: SCG10 蛋白纯化 融合蛋白 Western blot
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 491-493
• 分类号: Q257
• 语种: 中文

摘要

目的 构建SCG10的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达.方法 pcDNA3.1-SCG10质粒用BamHI和XhoI双酶切后,克隆至pGEX-5X-1栽体,IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)在BL21大肠杆茵中诱导glutathione S-transferase(GST)-SCG10 融合蛋白表达,利用GST-beads纯化诱导的融合蛋白,经Western blot印迹鉴定.结果 SCG10全长编码序列克隆至pGEX-5x-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在BL21大肠杆茵中IPTG诱导融合蛋白的表达分子量为47 kDa,成功纯化出GST及GST-SCGl0蛋白,Wstem blot检测到蛋白表达.结论 构建了SCG10基因原核表达载体,鉴定了GST-SCG10融合蛋白表达.