幽门螺杆菌基因hpaA克隆、融合表达和鉴定

• 作者: 宋春花 段广才 范清堂 郗园林 黄学勇 黄志刚
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 粘附素基因 克隆 融合表达
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 274-277,281
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.03.017

摘要

目的 克隆幽门螺杆菌粘附素基因hpaA,构建幽门螺杆菌hpaA基因与麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体,并进行诱导表达,鉴定融合蛋白免疫原性,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据.方法 利用PCR技术从H.pylori郑州分离株MEL-HP27染色体DNA上扩增出hpaA基因,序列分析后,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coli TB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western blot鉴定其免疫原性.结果 用PCR方法扩增的hpaA基因长度为783bp,编码260个氨基酸,经酶切鉴定和测序,插入到克隆载体的基因片段与预期目的DNA片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为29kDa,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的26%.结论 本研究成功构建了hpaA基因与麦芽糖结合蛋白基因融合原核表达系统,为幽门螺杆菌基因工程组分疫苗的研究奠定基础.