SIK2 cDNA及其截短体原核表达重组体的构建及表达

• 作者: 刘旭 刘晓丹 周平坤 李珊珊 王建校 王攀 王豫 赵珊珊 顾永清
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 盐诱导激酶 SIK2 GST 融和蛋白 诱导表达 重组质粒
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 290-294
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201403002

摘要

目的：构建 SIK2 cDNA及其截短体的原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达。方法分别设计 SIK2及其截短体引物,采用PCR方法分别扩增 SIK2、SIK2-Δ1(280~926)、SIK2-Δ2(400~926)、SIK2-Δ3(1~400)、SIK2-Δ4(700~926)五个 cDNA片段,并将扩增的 cDNA片段插入原核表达载体 pGEX-4T-2,构建 GST标签的重组质粒。将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导SIK2、SIK2-Δ1、SIK2-Δ2、SIK2-Δ3和SIK2-Δ4五个截短体的原核表达,用考马斯亮蓝染色和Western blot进行鉴定。结果成功构建了SIK2全长及其截短体cDNA的重组质粒,用考马斯亮蓝染色及 Western blot鉴定显示,SIK2全长及其截短体重组质粒均在大肠杆菌中诱导表达。结论在大肠杆菌中成功地诱导表达了 SIK2重组蛋白及其截短体,为进一步研究 SIK2各结构域的功能提供了实验基础。