丙型肝炎病毒C区截短型基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 尹文 楚雍烈 胡刚 董晓慧 薛小平 雷迎峰
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 丙型肝炎病毒(HCV) 核心蛋白 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 320-322,326
• 页数: 4页
• 分类号: R373.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2005.04.005

摘要

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白.方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-Ct,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达截短型C蛋白.结果扩增得到目的基因长度为462bp,构建pBVIL1-Ct表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的24%.Western-Blot及ELISA检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应.结论羧基端部分缺失的HCV C区基因片段可在大肠杆菌中稳定表达并具有良好的反应原性.