重组鸡细胞外脂肪酸结合蛋白的原核表达及鉴定

• 作者: 卢晓晓 宁官保 张宁 张鼎 李娜娜 李欣 田志雄 田文霞 赵宇军 郭敏 闫芳 高荣琨
• 来源期刊: 山西农业科学
• 关键词: 细胞外脂肪酸结合蛋白 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 855-859,888
• 页数: 6页
• 分类号: S831
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2481.2020.06.06

摘要

细胞外脂肪酸结合蛋白(Extracellular Fatty Acid-Binding Protein,Ex-FABP)是一种鸡胚发育过程中表达于肥大软骨、肌肉纤维和血粒细胞中的脂蛋白,大小约为21 ku.试验通过构建Ex-FABP原核表达载体,以实现Ex-FABP蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定;以艾维茵肉鸡胫骨软骨总RNA为模板,RT-PCR扩增Ex-FABP基因,连接pGEM-T克隆载体后,再与载体pET-28a连接并转化,获得含pET-28a-Ex-FABP重组表达质粒的Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株;使用IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定表达情况,利用镍柱亲和层析法纯化蛋白,对纯化蛋白进行Western Blot鉴定.结果表明,试验成功构建重组表达载体pET-28a-Ex-FABP;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果显示,目的蛋白在24 ku附近出现特异性条带,表明表达蛋白正确.试验成功表达了大量纯度比较高的Ex-FABP蛋白,可为后续的动物试验以及家禽疾病的研究提供理论依据.