Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立

• 作者: 于利
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: CHO细胞 分子马达蛋白质类 耳蜗 毛细胞,听觉,外 质粒 转染 逆转录聚合酶链反应 荧光免疫测定
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 625-627
• 分类号: R329
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2011.07.017

摘要

建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白(prestin)的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株(CHO).方法:采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400～800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素(200～400 mg/L).收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),对扩增产物进行凝胶电泳分析.采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达.结果:采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性；利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率＞90％.结论:成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于利	辽宁医学院生理教研室	18	41	5.0	5.0