稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢细胞株的建立

• 作者: 刘培庆 徐索文 黄燕
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 烟酸受体 真核表达载体 分子克隆 中国仓鼠卵巢细胞
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 305-309
• 分类号: R965.1
• 语种: 中文

摘要

目的 将GPR109A基因插入pEGFP-N3载体中构建重组质粒pEGFP-GPR109A,并建立稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞株.方法 构建重组质粒pEGFP-GPR109A,重组质粒转化大肠杆茵DH5a,重组质粒经PCR、酶切、测序验证正确后,应用脂质体转染技术将该质粒导入CHO细胞,用抗生素G418筛选稳定表达的细胞.倒置荧光显微镜观察克隆细胞株荧光信号,RT-PCR检测GPR109A基因mRNA表达,Westem Blotting检测绿色荧光蛋白与烟酸受体GPR109A的融合蛋白(GFP-GPR109A)的表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位.结果 pEGFP-GPR109A真核表达质粒构建正确,融合蛋白GFP-GPR109A在CHO细胞中稳定表达,表达的融合蛋白主要定位于细胞膜.结论 成功构建pEGFP-GPR109A真核表达载体并建立其稳定表达的CHO细胞株;该细胞株的建立有助于GPR109A的更多生理病理功能研究,也为下一步抗动脉粥样硬化的药物筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘培庆	中山大学药学院药理毒理实验室	102	650	14.0	20.0
2	黄燕	中山大学药学院药理毒理实验室	22	20	3.0	4.0
3	徐索文	中山大学药学院药理毒理实验室	7	71	4.0	7.0