稳定表达大麻受体2的CHO细胞株的构建

• 作者: 宫泽辉 徐波 李素燕 颜玲娣
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大麻受体2 基因转染 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 140-145
• 页数: 6页
• 分类号: R965
• 字数: 3251字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2009.02.010

摘要

目的 建立稳定高效表达人重组大麻受体2(CB2)的中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞株,为体外高通量筛选CB2激动剂和拮抗剂奠定基础.方法 通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pcDNA3.1(+)-CB2转染入CHO-K1细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;培养并收集耐药克隆细胞,用RT-PCR方法做进一步筛选;序列测定鉴定整合基因的序列;筛选的阳性克隆用放射性配体-受体结合实验进行进一步的鉴定和受体活性分析.结果 转染细胞在含G418的选择性培养基中生长出28个耐药单克隆,用RT-PCR方法检测出17个CB2 mRNA表达量较高的阳性克隆;RT-PCR扩增片段测定鉴定正确;挑选其中最优的克隆进行放射性配体-受体结合实验,结果显示,表达受体具有与CB2激动剂WIN55212-2特异结合的活性,其Kd和Bmax值分别(1.21±0.47)nmol·L-1和(3.12±0.7)nmol·g-1蛋白,这一结果与天然CB2的特性相似.结论 建立了稳定高效表达人重组CB2的CHO-K1细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宫泽辉	军事医学科学院毒物药物研究所	96	528	12.0	18.0
2	颜玲娣	军事医学科学院毒物药物研究所	28	138	6.0	9.0
3	徐波	军事医学科学院毒物药物研究所	12	31	3.0	5.0
4	李素燕	军事医学科学院毒物药物研究所	5	85	3.0	5.0