结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs和正常细胞株TSC2+/+MEFs微小RNA表达谱的差异分析

• 作者: 张玉石 李汉忠 王文达 蔡燚 郭浩
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 结节性硬化症 细胞系 微RNAs 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 580-584
• 页数: 5页
• 分类号: R593.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2017.04.005

摘要

目的:结节性硬化症是由于TSC1和TSC2基因突变导致累及多个器官、系统的常染色体显性遗传疾病,TSC2突变更为常见而且临床表型更为严重.为探讨结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs与正常细胞株TSC2+/+ MEFs中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的差异,以进一步研究相关miRNA在结节性硬化症发病机制中的作用奠定基础.方法:体外培养结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs和正常细胞株TSC2+/+ MEFs,各选取3个样本分别作为实验组和对照组.用TRizol法提取细胞的总RNA,以紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳对RNA进行质量检测.采用miRNA芯片筛选两者之间差异表达的miRNA,样品间表达变化标准以上调至原2倍或下调至原1/2作为阈值范围,并以实时定量PCR验证miRNA芯片结果的可靠性.CCK-8法测定细胞增殖活性. 结果:在结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs中,上调≥原2倍差异表达的miRNA分子有14个,下调≤原1/2差异表达的miRNA分子有26个.miRNA-199a-5p在TSC2-/-MEFs显著低表达,过表达miRNA-199a-5p可显著抑制TSC2-/-MEFs细胞增殖.结论:结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs和正常细胞株TSC2+/+ MEFs存在差异表达miRNA分子.miRNA-199a-5p参与结节性硬化症的发生、发展,可能是防治结节性硬化症的重要分子靶点.