β-分泌酶底物肽反转录病毒载体及其包装细胞株的构建

• 作者: 吴志新 崔媛媛 王兰 石明娟 胡海涛 董炜疆 赵璇 郑慧媛
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 阿尔茨海默病 β-分泌酶底物肽 反转录病毒载体 包装细胞株 转染
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 624-626
• 页数: 3页
• 分类号: R329
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2007.06.006

摘要

目的 用pLXSN反转录病毒载体构建介导β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因表达的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立高效、稳定表达BACEsp的包装细胞株.方法 根据BACEsp基因序列设计引物,PCR合成的BAC-Esp片段和pLXSN载体用EcoRⅠ、BamH Ⅰ双酶切后连接,构建成表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体.用脂质体介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选后,挑单克隆扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.结果 经酶切、连接后构建成的质粒称为pLXSN-BACEsp,经测序证实构建成功,无任何碱基突变.经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立BAC-Esp高效表达的包装细胞株.结论 成功构建了能表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立了稳定、高效地产生有活性的BACEsp产毒包装细胞株.