人HGF基因重组逆转录病毒表达载体及包装细胞株的构建和鉴定

• 作者: 南雪 岳文 李艳华 王韫芳 裴雪涛 闫舫
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝细胞生长因子 包装细胞PT67 逆转录病毒载体 PT/HGF细胞株 转染
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 205-208
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3541字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.03.002

摘要

目的:构建携带肝细胞生长因子(HGF)的逆转录病毒载体,并建立高效、稳定生产HGF的包装细胞株.方法:以pcDNA3.0-HGF质粒为模板进行PCR反应扩增出HGF基因全长序列,亚克隆至逆转录病毒载体pMSCVneo构建重组逆转录病毒质粒,以脂质体介导转染包装细胞PT67,经G418筛选,进而挑选抗性集落扩大培养后,用靶细胞NIH3T3测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.扩大培养后进行RT-PCR鉴定HGF mRNA的表达.扩大培养NIH3T3细胞抗性集落(NIH3T3/HGF),并用细胞培养上清进行人肝癌细胞系HepG2的扩散试验.结果:PCR反应扩增出2 200 bp的HGF基因,构建了重组逆转录病毒表达载体pMSCV-HGF,测序鉴定正确.经脂质体介导转染包装细胞、G418筛选和NIH3T3测定病毒滴度,筛选出具有最高病毒滴度(8.8×107 cfu /ml)的细胞集落,扩大培养后建立高效表达HGF的包装细胞株PT/HGF,RT-PCR证实HGF基因在PT/HGF中有转录.NIH3T3/HGF培养上清可使HepG2细胞扩散,形态改变.结论:成功构建了携带HGF的逆转录病毒载体pMSCV-HGF,并建立了稳定、高效生产有活性的HGF的产毒细胞株PT/HGF.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴雪涛	军事医学科学院野战输血研究所	124	630	13.0	20.0
2	南雪	军事医学科学院野战输血研究所	8	40	4.0	6.0
3	岳文	军事医学科学院野战输血研究所	23	90	6.0	8.0
4	闫舫	军事医学科学院野战输血研究所	12	42	4.0	6.0
5	李艳华	军事医学科学院野战输血研究所	12	114	4.0	10.0
6	王韫芳	军事医学科学院野战输血研究所	23	163	7.0	11.0