FAK-shRNA重组逆转录病毒载体的构建及稳定表达细胞株的筛选

• 作者: 何强 林武 阿力亚
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 黏着斑激酶 RNA干扰 逆转录病毒载体 肝肿瘤
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 688-694
• 分类号: R363
• 字数: 4940字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.04.013

摘要

目的:研究利用RNA干扰技术,以黏附斑激酶(FAK)为靶基因,构建FAK-shRNA重组逆转录病毒载体,将其导入包装细胞Phoenix中,筛选出稳定产生FAK-shRNA病毒的细胞克隆,以病毒上清感染并筛选FAK表达沉默的细胞株,观察其对相关蛋白表达的影响.方法:体外合成能转录产生靶向FAK短发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸并定向克隆入pSuper.retro逆转录病毒载体,以脂质体法转染Phoenix细胞株,待筛选稳定克隆成功后收获病毒上清,感染人肝癌细胞株HCC-LM3,以嘌呤霉素筛选得到抑制FAK表达的稳定细胞株后用Western boltting鉴定FAK表达的抑制效果及相关蛋白表达情况.结果:构建了重组逆转录病毒载体pSuper-FAK并抑制了人肝癌HCC-LM3细胞内FAK蛋白的表达.在下调FAK表达的细胞株中p-Akt和p-MAPK1/2表达明显受到抑制.下调FAK的细胞株迁移和侵袭能力下降,细胞周期多被阻止在G0/G1期,细胞凋亡增多,增殖率明显下降.结论:重组逆转录病毒载体pSuper-FAK转染包装细胞Phoenix后,其产生的FAK-shRNA病毒可以抑制HCC-LM3细胞内的FAK蛋白表达并抑制Akt及MAPK1/2磷酸化.下调FAK后可以对肿瘤细胞的生物学行为产生明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何强	中山大学附属第一医院肝胆外科	30	117	7.0	8.0
2	阿力亚	中山大学附属第一医院肝胆外科	9	55	5.0	7.0
3	林武	中山大学附属第一医院肝胆外科	1	3	1.0	1.0