利用慢病毒载体建立过表达Nfe2l2基因的L929细胞株实验研究

• 作者: 刘成 刘耀丹 李倩男 李洋 杨将 汤剑明 洪莉
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 转染 慢病毒属 Nfe2l2 成纤维细胞 细胞外基质
• 年，卷（期）: 2018,（30）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3723-3729
• 页数: 7页
• 分类号: R394
• 语种: 中文
• DOI: 10.12114/j.issn.1007-9572.2018.00.215

摘要

目的 利用慢病毒载体建立过表达Nfe2l2基因的L929细胞株,为探讨Nfe2l2基因在结缔组织成纤维细胞细胞外基质(ECM)重构中的作用奠定实验基础.方法 2014年12月—2015年5月,通过双酶切将Nfe2l2目的基因连接到GV341载体(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin),经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV341载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-Nfe2l2,病毒感染L929细胞72 h后筛选稳定表达的细胞株L929/LV-Nfe2l2,采用Real-time qPCR测定Nfe2l2的表达.结果 经比对,构建的LV-Nfe2l2阳性克隆序列与目的基因Nfe2l2相符;L929细胞达到80％感染效率的最佳感染条件为:在ENi.S培养基中进行感染,设定感染复数(MOI)为8～10,感染时间为72 h.Real-time qPCR结果显示,经筛选的L929/LV-Nfe2l2细胞中Nfe2l2基因表达丰度为高(ΔCt值≤12).结论 本研究成功构建了一种过表达Nfe2l2基因的慢病毒载体;LV-Nfe2l2感染L929细胞后可实现目的基因的高表达,经筛选的L929/LV-Nfe2l2细胞株可用于后续实验研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪莉	武汉大学人民医院妇二科	165	1051	17.0	23.0
2	李洋	武汉大学人民医院妇二科	61	145	7.0	9.0
3	刘耀丹	武汉大学人民医院妇二科	8	17	2.0	4.0
4	李倩男	武汉大学人民医院妇二科	6	16	2.0	4.0
5	刘成	武汉大学人民医院妇二科	26	99	6.0	9.0
6	汤剑明	武汉大学人民医院妇二科	16	70	5.0	8.0
7	杨将	武汉大学人民医院妇二科	9	22	3.0	4.0