过表达Pitx3基因慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立

• 作者: 亢小玉 高锦
• 来源期刊: 医学信息
• 关键词: Pitx3 慢病毒 载体构建 过表达
• 年，卷（期）: 2014,（37）
• 所属期刊栏目: 荫临床医学 -- 论著
• 页码范围: 51-52
• 页数: 2页
• 字数: 3056字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建并包装大鼠Pitx3基因过表达慢病毒并建立稳定过表达Pitx3基因的MES23.5多巴胺能神经细胞株。方法采用RT-PCR方法扩增Pitx3基因片段并将其连接于含有嘌呤霉素抗性的Plv-cs2.0-N-FLAG载体质粒，采用慢病毒包装四质粒系统(pRRE/pVSVS/pREV/pLV)，用转染试剂Lipofectamine 2000将四质粒按一定比例转染293T细胞；收集慢病毒上清并感染MES23.5细胞株，嘌呤霉素稳定表达Pitx3的MES23.5细胞株，Western blot ing检测Pitx3蛋白的表达。结果限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳结果表明在900bp处有一明显条带；Pitx3测序结果显示序列与gene bank上的序列完全一致；嘌呤霉素筛选病毒感染的MES23.5细胞，传代筛选第5代后细胞几乎无死亡现象；Western blot ing结果显示，在分子量为43kDa处有相应条带。结论成功构建过表达Pitx3基因的慢病毒表达载体并建立了稳定表达Pitx3基因的MES23.5细胞株，此研究为进一步探讨Pitx3基因的功能提供了良好的研究工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高锦		12	4	1.0	2.0
2	亢小玉		3	1	1.0	1.0